Análisis y caracterización avanzados de impurezas

Realizamos un estudio comparativo exhaustivo de impurezas con respecto al medicamento de referencia (RLD) para garantizar los más altos estándares de pureza. Nuestra rigurosa caracterización incluyó:

•  Integridad de la secuencia: producto de longitud completa (FLP), secuencias más cortas (N-1) y secuencias más largas (N 1).
• Variantes de modificación: Análisis detallado de las sustituciones 2'-MOE y 2'-O-EOE, incluidas las variantes específicas de bases (mocG, mocA, moe-meU, moe-meC).
• Especies relacionadas con el proceso: Caracterización de artefactos CNET, ADP/IDP y monitorización exhaustiva de impurezas que eluyen antes y después de la elución.

Estudios definitivos de similitud

•  Espectrometría de masas (MS/MS):
• Determina el peso molecular exacto del nusinersén para verificar su composición química.
• La espectrometría de masas en tándem (MS/MS) fragmenta el oligonucleótido para confirmar la integridad de su secuencia e identificar cualquier impureza o producto de degradación.
• Espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN):
• Valida la estructura tridimensional del nusinersén, asegurando el correcto apareamiento de bases y la conformación de la cadena principal.
• Detecta posibles desviaciones o modificaciones estructurales.
• Cromatografía líquida (LC):
• Separa el nusinersén de impurezas, excipientes o subproductos relacionados con el proceso.
• Cuantifica la pureza y controla la estabilidad en condiciones de almacenamiento.
• Temperatura de fusión del dúplex (Tm):
• Mide la estabilidad térmica del dúplex formado entre el nusinersén y su cadena de ARN complementaria.
• Refleja la fuerza de unión y la eficiencia de hibridación, factores críticos para su mecanismo de acción.
• Espectroscopia de dicroísmo circular (CD):
• Analiza la estructura secundaria (por ejemplo, la hélice de forma A) del nusinersén.
• Garantiza un plegado adecuado y una estabilidad conformacional óptima.
• Calorimetría diferencial de barrido (DSC):
• Evalúa la estabilidad térmica midiendo la absorción de calor durante las transiciones estructurales (por ejemplo, la desnaturalización).
• Evalúa la consistencia entre lotes y la robustez de la formulación.
• Cromatografía de exclusión por tamaño (SEC):
• Determina la distribución del tamaño de los oligonucleótidos y detecta agregados o fragmentos.
• Garantiza que el nusinersén permanezca monomérico y dentro de los límites de tamaño especificados.
• Ultracentrifugación analítica de velocidad de sedimentación (SV-AUC):
• Proporciona un análisis de alta resolución del peso molecular, la forma y el estado de agregación.
• Valida la homogeneidad y confirma la ausencia de agregados de orden superior.