高级杂质分析与表征

 我们对参考上市药品（RLD）进行了全面的杂质对比研究，以确保达到最高的纯度标准。我们严格的表征包括：

•  序列完整性：全长产物 (FLP)、短链 (N-1) 和长链 (N 1)。
• 修饰变体：详细分析 2'-MOE 和 2'-O-EOE 替换，包括碱基特异性变体（mocG、mocA、moe-meU、moe-meC）。
• 与工艺相关的物种：CNET、ADP/IDP 产物的表征，以及对前洗脱和后洗脱杂质的全面监测。

权威的一致性研究

•  质谱分析（MS/MS）：
• 测定诺西那生的确切分子量，以验证其化学组成。
• 串联质谱 (MS/MS) 将寡核苷酸碎片化，以确认其序列完整性并识别任何杂质或降解产物。
• 核磁共振（NMR）波谱：
• 验证 nusinersen 的三维结构，确保正确的碱基配对和主链构象。
• 检测潜在的结构偏差或改变。
• 液相色谱法（LC）：
• 将诺西那生与杂质、赋形剂或工艺相关副产物分离。
• 量化纯度并监测储存条件下的稳定性。
• 双相熔化温度（Tm）：
• 测量 nusinersen 与其互补 RNA 链形成的双链的热稳定性。
• 反映了结合强度和杂交效率，这对其作用机制至关重要。
• 圆二色性（CD）光谱：
• 分析诺西那生的二级结构（例如，A型螺旋）。
• 确保正确的折叠和构象稳定性。
• 差示扫描量热法（DSC）：
• 通过测量结构转变（例如变性）过程中的热吸收来评估热稳定性。
• 评估批次间一致性和配方稳健性。
• 尺寸排阻色谱法（SEC）：
• 确定寡核苷酸的大小分布并检测聚集体或片段。
• 确保 nusinersen 保持单体状态并在规定的尺寸范围内。
• 沉降速度分析超速离心法（SV-AUC）：
• 提供分子量、形状和聚集状态的高分辨率分析。
• 验证了均质性，并确认不存在高阶聚集体。